SXT-100 独立成像工作流程
(CLXM)

SXT-100 支持多种样品安装形式，以适应不同的研究需求。标准的透射电镜栅格和剪切栅格是常用的，而玻璃毛细管和半栅格则为特定应用提供了替代方案。对于高压冷冻样品，定制支架可实现 ±90° 的全倾斜旋转，确保完整的断层扫描数据采集。这种灵活性最大限度地提高了与现有低温工作流程的兼容性，并拓宽了可成像生物样本的范围。

细胞在碳涂层金电镜定位栅格上或薄壁玻璃毛细管中制备。孵育后，在光学显微镜下筛选栅格以检查汇合度和蛋白质表达，然后吸去多余液体后，浸入液态乙烷中快速冷冻。对于厚度超过 5μm 的较大细胞或组织，采用“华夫饼”技术的高压冷冻可制备厚度约 12μm 以下的样品，足够薄以用于 SXT，同时保留天然超微结构。

SXT-100 包含一个集成的 5 通道宽场落射荧光显微镜，其发射滤光片针对 DAPI、GFP、RFP、Cy5 和 Cy7 荧光团进行了优化。该显微镜可以快速筛选样品，以识别用于 SXT 的单个、分离的细胞候选物。光学物镜方便地位于低温样品室中，与 X 射线轴成 90 度。一旦获得 FM 概览，栅格坐标可以转换为 X 射线轴进行成像。用户还可以选择使用市场上现有的低温显微镜载物台进行离线低温筛选。这提供了集成更高分辨率 FM 以与 SXT 进行关联的机会，例如低温共聚焦或 Airyscan 等。

旋转角度范围通常为 +/-60 度（用于栅格），或 +/-90 度（用于玻璃毛细管或放置在针上的高压冷冻柱状切片）。后者是 SXT-100 的另一个关键特性，可实现全旋转断层扫描并消除与平面样品相关的缺失楔形伪影。典型的断层图采集时间从 30 分钟到 2 小时不等，具体取决于细胞厚度。

制备完成后，栅格被装入转移支架，该支架由冷却转移杆拾取，并在转移到 SXT-100 期间，在冷氮气罩内保持。

样品通过真空载物锁垂直引入，并停靠在低温载物台上进行成像。从工作台到显微镜的整个转移过程不到一分钟，保持玻璃化并防止冰污染。成像后，样品可以安全地返回储存。

在获取荧光显微镜图像并将 SXT 倾斜系列重建为三维体积后，数据集进行关联以将分子信号映射到全细胞超微结构上。

此 CLXM 图像在单一视图中关联了功能和结构信息，使疾病和治疗研究人员能够更好地解释其天然细胞环境中的分子过程，并深入了解疾病机制和治疗效果。